Методы определения белка в крови

Метод относительно дешев, прост, обладает хорошей воспроизводимостью и специфичностью, использование его позволяет выполнять исследование как на анализаторах автоматических и полуавтоматических , так и на обычном фотометре. Белки реагируют в щелочной среде с сульфатом меди с образованием комплексных соединений, окрашенных в фиолетовый цвет. По интенсивности окрашивания, которое пропорционально количеству белка, определяют содержание его в сыворотке крови.

Дорогие читатели! Наши статьи рассказывают о типовых способах решения проблем со здоровьем, но каждый случай носит уникальный характер.

Если вы хотите узнать, как решить именно Вашу проблему - начните с программы похудания. Это быстро, недорого и очень эффективно!


Узнать детали

BIOSAFETY-CENTER

Способы, состоящие в определении плотности сыворотки — способ плавающей капли, также является неточным из-за влияния на плотность других веществ, находящихся в сыворотке. Весовые гравиметрические — весьма трудоемки и требуют больших количеств сыворотки.

Рефрактометрические методы — просты в исполнении, но неточны, так как рефракция сыворотки обусловливается также минеральными веществами и углеводами. Спектрофотометрические , заключающиеся в измерении степени cветопоглощения в ультрафиолетовой области при двух длинах волн с дальнейшим расчетом по специальным формулам и нм, и нм, и нм, и нм, и нм.

Белки реагируют в щелочной среде с сульфатом меди, образуя хелатные соединения фиолетового цвета. Интенсивность окраски пропорциональна числу пептидных связей. Концентрация общего белка в спинномозговой жидкости зависит от уровня позвоночного канала, на котором была взята проба.

Изменения концентрации общего белка могут иметь как абсолютный, так и относительный характер. Изменения абсолютного характера являются следствием колебаний содержания белка в крови, в свою очередь относительные изменения зависят от объема крови, то есть наблюдаются при обезвоживании или гипергидратации. Для того, чтобы отличить абсолютные изменения в плазме от относительных необходимо установить объем плазмы либо определить гематокрит.

Относительная связана с нарушением водного баланса — гипергидратацией при гиперальдостеронизме, при почечной недостаточности со снижением экскреции солей, при использовании для питья морской воды, при неадекватных инфузиях солевых растворов. Истинное повышение концентрации белка в крови обычно сопровождается увеличением фракции глобулинов. Относительная гиперпротеинемия вызывается потерями внутрисосудистой жидкости в результате профузных поносов например, холере , усиленном потоотделении, неукротимой рвоте, несахарном диабете, тяжелых и обширных ожогах, генерализованных перитонитах.

Небольшое количество белка в суточной моче присутствует и у вполне здоровых лиц, однако в разовой порции мочи такие концентрации обычными методами не выявляются. Обнаружение в моче белков чаще всего свидетельствует о заболеваниях почек с нарушением почечного фильтра. Принято подразделять протеинурию в зависимости от места возникновения:. Повышение количества общего белка в спинномозговой жидкости наблюдается при заболеваниях, приводящих к нарушению гематоэнцефалического барьера менингит, энцефаломиелит.

Общий белок Все известные способы определения концентрации общего белка подразделяют на следующие группы: 1. Колориметрические , основанные на цветных реакциях белков: методы, основанные на неспецифическом связывании красителя простой абсорбции , достаточно чувствительны, но степень связывания красителя зависит от индивидуальных свойств белка метод с кумасси бриллиантовым голубым.

Существуют разные модификации этого метода с целью увеличения интенсивности окраски и ее стабильности, повышения устойчивости реактива. Например, тартрат добавляют как стабилизатор, который при комплексировании с ионами меди предотвращает их осаждение в щелочной среде, KJ предотвращает спонтанное восстановление щелочного тартрата меди и осаждение оксида меди и, следовательно, повышает устойчивость реактива. Чувствительность и специфичность метода зависит от используемой длины волны: нм, нм или нм.

Метод считается самым специфичным и точным, так как присутствие ароматических аминокислот, фенолов, мочевой кислоты не влияет на биуретовую реакцию. Максимум поглощения находится в диапазоне нм. В составе рабочего реактива имеется биуретовый реактив, что позволяет определять также пептидные связи. К недостатку метода относится: во-первых, отрицательное влияние на развитие окраски веществ, используемых для выделения, очистки и солюбилизации белков детергентов, компонентов буферных систем, сульфгидрильных и других восстанавливающих агентов, пуринов, глицина, сахарозы, сернокислого аммония и др ; во-вторых, отсутствие линейной зависимости интенсивности окраски от количества белка-стандарта.

Метод более чувствителен по сравнению с биуретовым, но специфичность его ниже, так как интенсивность окраски зависит от аминокислотного состава белка, а также от последовательности расположения аминокислот и степени экранирования функциональных групп.

Нефелометрические методы. Поляриметрические методы. Определение количества общего белка в сыворотке крови биуретовым методом Принцип Белки реагируют в щелочной среде с сульфатом меди, образуя хелатные соединения фиолетового цвета. Клинико-диагностическое значение Изменения концентрации общего белка могут иметь как абсолютный, так и относительный характер. Сыворотка Гипопротеинемия Истинная абсолютная cвязана с: недостаточным потреблением белка с пищей — заболевания желудочно-кишечного тракта, сужение пищевода опухоли , недоедание, полное или частичное голодание.

Гипопротеинемия обычно сопровождается уменьшением фракции альбуминов крови разведение. Гиперпротеинемия Истинное повышение концентрации белка в крови обычно сопровождается увеличением фракции глобулинов. Моча Небольшое количество белка в суточной моче присутствует и у вполне здоровых лиц, однако в разовой порции мочи такие концентрации обычными методами не выявляются.

Принято подразделять протеинурию в зависимости от места возникновения: преренальную, связанную с усиленным распадом белков тканей или выраженным гемолизом; ренальную, обусловленную патологией клубочков или канальцев почек; постренальную, связанную с воспалением мочевыводящих путей. Спинномозговая жидкость Повышение количества общего белка в спинномозговой жидкости наблюдается при заболеваниях, приводящих к нарушению гематоэнцефалического барьера менингит, энцефаломиелит.

Амниотическая жидкость Исследование количества белка применяют для контроля за течением беременности.

4. Определение общего белка в сыворотке крови по биуретовой реакции

Разработан в году Горналлом, Бардавиллом и Дэвидом, ныне мало используется в биохимической лабораторной практике за исключением медицинских анализов на белок из-за низкой чувствительности. Основан на образовании биуретового комплекса имеет фиолетовый цвет пептидных связей белков с двухвалентными ионами меди. В методе используют т. Полноценный комплекс образуется лишь с пептидами, состоящими более чем из 4 остатков. Оптическую плотность раствора прямо пропорциональную концентрации пептида определяют при — нм. К достоинствам метода стоит отнести его низкую чувствительность к посторонним веществам, невысокую погрешность.

Биуретовый метод

При исследовании большого количества проб крови от животных актуальной остается проблема использования методов, позволяющих ускорить и удешевить скрининговые лабораторные исследования. В медико-биологической практике биохимических лабораторных исследований давно и широко используется стандартный метод определения концентрации белка в моче путем преципитации сульфосалициловой кислотой. Впервые исследовал возможность обнаружения белка путем осаждения его кислотой Брайт еще в далеком году. Метод вполне сформировался к году Folin at al. Он был адаптирован нами для определения концентрации общего белка в сыворотке и плазме крови животных. Принцип метода заключается в оценке ослабления светового потока, возникающего при образовании суспензии вследствие добавления к белоксодержащей пробе раствора сульфосалициловой кислоты турбодиметрический анализ. Степень помутнения пропорциональна концентрации общего белка.

Общий белок

Способы, состоящие в определении плотности сыворотки — способ плавающей капли, также является неточным из-за влияния на плотность других веществ, находящихся в сыворотке. Весовые гравиметрические — весьма трудоемки и требуют больших количеств сыворотки. Рефрактометрические методы — просты в исполнении, но неточны, так как рефракция сыворотки обусловливается также минеральными веществами и углеводами. Спектрофотометрические , заключающиеся в измерении степени cветопоглощения в ультрафиолетовой области при двух длинах волн с дальнейшим расчетом по специальным формулам и нм, и нм, и нм, и нм, и нм. Белки реагируют в щелочной среде с сульфатом меди, образуя хелатные соединения фиолетового цвета. Интенсивность окраски пропорциональна числу пептидных связей. Концентрация общего белка в спинномозговой жидкости зависит от уровня позвоночного канала, на котором была взята проба. Изменения концентрации общего белка могут иметь как абсолютный, так и относительный характер. Изменения абсолютного характера являются следствием колебаний содержания белка в крови, в свою очередь относительные изменения зависят от объема крови, то есть наблюдаются при обезвоживании или гипергидратации.

Известные способы определения концентрации общего белка в сыворотке плазме крови можно разделить на:. Азотометрические методы.

.

.

.

Комментариев: 4

  1. Шишкина:

    он что есть в продаже?

  2. deluazi:

    Ирина, нет ничего проще. Вам нужно найти в Екатеринбурге доктора Чана. Вот и все.

  3. Георгий:

    александр, про ваше логическое мышление, с прискорбием можно только заявить, что если был бы ты умнее, то сказали что дурак. Поэтому отвали. Но на будущее не светись в Интернете своим дебелизьмом, который в один ряд ставит раскисление почвы с очищением капилляров.

  4. vla18351:

    грудь -это молочные ЖЕЛЕЗЫ